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06 avr
06/04/2021 14:00

Sciences & Société

Soutenance de thèse : Laura FABRE

Sondes polymères fluorescentes pour le marquage spécifique de protéines

Doctorante : Laura FABRE

Laboratoire INSA : IMP

Ecole doctorale : ED34 : Matériaux de Lyon

Ce travail a tout d’abord consisté à synthétiser des chaines polymères fluorescentes qui combinent à la fois i) un copolymère de taille et de structure contrôlées, obtenu par polymérisation RAFT, ii) des fluorophores AlexaFluor647 qui émettent dans le rouge lointain et qui sont très performants pour la microscopie optique de super-résolution dSTORM, iii) une extrémité modifiée avec une fonction dibenzylcyclooctyne (DBCO) capable de réagir de façon très efficace avec un azoture par chimie click bio-orthogonale. Ces chaines polymères fluorescentes, caractérisées par différentes techniques de chromatographie d’exclusion stérique et RMN, ont ensuite été utilisées pour développer deux nouvelles familles de sondes capables de marquer spécifiquement des protéines : des sondes polymère-aptamère et des sondes polymère-anticorps.
Pour la première application, la chaine polymère fluorescente a été conjuguée avec l’aptamère nucléotidique AS1411 qui reconnaît spécifiquement la nucléoline. Après caractérisation par gel d’électrophorèse, il a été vérifié que la sonde polymère-aptamère conduit à un marquage spécifique de la nucléoline lors d’expériences in vitro et in cellulo. Enfin, la sonde a pu être observée par microscopie de super-résolution dSTORM pour localiser très précisément la nucléoline à la surface de la membrane cellulaire.
Pour la seconde application, un anticorps (IgG) a été modifié enzymatiquement pour exprimer la fonction azoture au niveau des glycanes de son domaine constant. Cette stratégie a ensuite permis de conjuguer de façon régio-spécifique la chaine polymère fluorescente sur l’anticorps. Des évaluations in cellulo par cytométrie en flux ont démontré que cette sonde polymère-anticorps conservait sa capacité à reconnaître spécifiquement sa protéine cible
Les chaines polymères fluorescentes synthétisées au cours cette thèse ont un intérêt allant au-delà du marquage spécifique de protéines et peuvent être utilisées pour un grand nombre d’applications biologiques.

Informations complémentaires

  • Salle de réunion du bâtiment Polytech (3e étage) - Visioconférence